使用程序降溫盒是**-常用的凍存方法。市面上的降溫盒有些需要添加異丙醇，有些則不需要。
降溫盒須恢復室溫后再使用。
根據普諾賽實驗室細胞培養經驗，使用程序凍存盒凍存效果良好，沒有凍存盒的同學可以參照下文方法二和方法三。
操作步驟
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2：離心收集對數生長期的細胞（貼壁細胞消化下來離心，懸浮細胞直接離心，轉速1200rpm或250g，時間3min）
步驟3：用配制好的凍存液重懸細胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標記
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過夜（24h）
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉移至液氮長期保存
使用凍存盒操作示意圖
▲使用凍存盒操作示意圖
方法二：使用無血清非程序凍存液
無血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無需自己配制，無需降溫盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有細胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測試，沒問題后再批量應用。
操作步驟
步驟1：從冰箱拿出無血清非程序凍存液，待用
步驟2：離心收集對數生長期的細胞（貼壁細胞消化下來離心，懸浮細胞直接離心，轉速1200rpm或250g，時間3min）
步驟3：棄上清，加入適量無血清非程序凍存液，重懸細胞
步驟4：按照1~1.5mL/管的量分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標記
步驟5：將凍存管直接移入-80℃冰箱中，24h后轉移至液氮長期保存
使用無血清非程序凍存液操作示意圖
▲使用無血清非程序凍存液操作示意圖
方法三：手動梯度降溫
在沒有凍存盒或者非程序凍存液時，可以選擇手動梯度降溫。但手動梯度降溫不適用于所有細胞，且效果不穩定，同樣需要**做凍存測試。
http://www.whprocell.com/Products-35908602.html
https://www.chem17.com/st481892/product_35908602.html